對於 鐮狀 細胞 及 正常 紅血球 的 血紅素 研究 便 具有 上述 這些 特質 。 他 的 目標 在於 將 蛋白質 鏈 打斷成 較 短 的 片段 ， 再 觀察 是否 能 在 這 兩 種 血紅素 中 找出 任何 不同 的 片段 。 他 一 開始 用 的 是 純化 的 樣本 。 他 將 樣本 加熱到 接近 沸騰 ， 持續 好幾 分鐘 ， 因為 這樣 做 可以 將 摺疊 的 蛋白質 多 ?
 
鏈 打開 並 分離 。 等到 樣本 冷卻 後 ， 分別 加入 少量 的 消化 酵素 「 胰蛋白 ?
 
」 （ trypsin ） ， 然後 維持 在 人體 血液 常 溫達 幾 天 之 久 （ 後來 他 才 知道 ， 這 個 消化 步驟 其實 只 需要 九十 分鐘 ） 。 胰蛋白 ?
 
分子 能 打斷 胜 ?
 
鍵 ， 但是 只 能 作用 在 兩 種 帶 正 電荷 且 非常 相似 的 胺基酸 鍵結 旁邊 ， 即 離 胺酸 與 精胺酸 ； 事實 上 ， 胰蛋白 ?
 
只 會 切斷 蛋白質 鏈骨 幹 上離胺酸 與 精胺酸 的 一 邊 鍵結 ， 而 不會 打斷 另 一 邊 。 像 這樣 斷裂 能力 具有 絕佳 專一性 的 酵素 是 一 種 好 工具 ， 價值 非常 明顯 ； 桑格 便 曾 靠 著 胰蛋白 ?
 
， 將 胰島素 切成 永遠 相同 的 一 組 片段 ， 再 將 它們 分類 來 進行 個別 分析 。 每 個 血紅素 分子 約 有 六十 個 鍵結 是 胰蛋白 ?
 
可以 打斷 的 ， 不過 比魯茲 發現 血紅素 是 由 相等 的 兩 半 接合 而 成 ， 因此 胰蛋白 ?
 
應該 只 會 將 該 分子 切出 大約 三十 種 片段 ， 而且 永遠 是 同樣 的 三十 種 。 這些 片段 的 平均 長度 約為 十 個 胺基酸 。 「 重點 是 ， 兩 個 相當 大 的 蛋白質 之間 一 個 小小 的 差異 ， 在 一 個 短 片段 中 就 會 變成 相當 大 的 差異 ， 」 英格拉姆 說 ， 「 而 這 就 是 重點 。 」 他 想到 ， 若 把 電泳 與 層析法 組合 起來 ， 在 一 張 濾紙 上 先後 進行 ， 那麼 即使 小 到 只 有 一 個 胺基酸 的 變化 ， 應該 也 能夠 偵測 得 到 。 於是 ， 血紅素 消化 完成 後 的 第二 天 早晨 ， 英格拉姆 開始 做 實驗 ， 從 一 份 樣本 取出 一 小 滴 ， 將 它 滴 在 一 大 張 濾紙 靠近 邊緣 、 位於 左右 兩 端 約 五分之二 的 地方 ， 並 在 該 點 做 了 記號 。 然後 他 將 這 張 濾紙 夾進 兩 片 玻璃板 中間 ， 再 把 玻璃板 連同 濾紙 一起 放入 解離度 很 大 的 溶劑 中 ； 溶劑 成分 為 刺鼻 的 弱鹼性 化學 物質 ?
 
啶 （ pyridine ） 以及 更 刺鼻 的 乙酸 ， 混合 後 呈 弱酸性 ， 味道 十分 難聞 。 放入 後 通 以 微量 電流 ， 方法 是 在 濕濾紙 上 標示 記號 處 的 左右 兩 端 分別 接上 電極 。 每 個 樣本 他 都 用 這 種 方式 來 處理 。 他 讓 電流 通 了 兩 個 半 小時 ， 然後 將 濾紙 取出 、 弄乾 。 在 這 個 階段 ， 濾紙 若 曾 滴上 帶有 蛋白質 的 化學 物質 ， 就 會 伸展出 一 條 不 規則 的 污跡 留在 底部 邊緣 ， 從 做 記號 的 那 一 點 開始 ， 幾乎 完全 朝 左邊 伸展出去 ； 污跡 最 濃 的 部分 是 在 第一 次 滴下 樣本 的 地方 ， 至於 右邊 則 完全 不 見 蹤影 ， 只有 右邊 很 遠處 有 一 個 獨立 斑點 。 這 是 電流 的 傑作 。 每 個 血紅素 片段 都 帶有 自己 的 電荷 ， 依照 胺基酸 組成 而 定 ； 在 溶液 裡 ， 正電 荷片段 會 被 電流 推 著 往 左邊 行進 ， 移動 得 愈 快 表示 電荷 愈 強 ， 中性 的 片段 則 全 都 輕鬆 地 留在 原地 ， 至於 所有 負 電荷 片段 則 向 右邊 行進 。 不同群 的 片段 也 可能 重疊 在一起 ； 當然 英格拉姆 知道 ， 這 時候 還 不能 用 染色法 使 之 顯影 。 若要 將 重疊 的 部分 區分開 ， 下 一 個 步驟 是 讓 每 一 小 群 片段 轉 九十 度 ， 大 踏步 橫越 「 閱兵場 」 。 英格拉姆 用 彈簧夾 把 每 片 濾紙 吊 在 一 條 線 上 ， 讓 濾紙 下方 帶有 蛋白質 污跡 的 邊緣 輕輕 碰觸 另 一 種 混合 溶劑 ， 這 次 用 的 是 酒精 、 乙酸 和 水 。 當 液體 沿著 濾紙 表面 向 上 爬 的 時候 ， 也 會 將 血紅素 片段 帶 著 跑 ， 最 輕 的 片段 爬 得 最 快 。 等到 整 張 濾紙 都 濕 到 頂 了 ， 英格拉姆 就 鬆開 濾紙 ， 讓 它們 平躺 ， 再度 晾乾 。 經過 染色 後 ， 現在 有 許多 蛋白質 片段 在 濾紙 上 現身 了 ， 這些 斑點 散布 在 一 個 三角形 的 區塊 內 ， 斑點 有 大 有 小 ， 呈現 不 規則 的 圓形 ， 好像 海灘 上 的 鵝卵石 。 濾紙 上 果真 出現 三十 種 不同 的 寡胜 ?
 
。 三角形 區塊 的 一 邊 是 從 原點 開始 往 上 延伸 ， 一直 排 的 斑點 好像 一 根 骨幹 ， 有些 斑點 仍 會 輕微 重疊 ， 這些 是 電荷 不正 也 不 負 的 片段 ， 因此 在 第一 步 都 停留 不 動 。 在 它 右邊 出 了 三角形 區塊 共 有 兩 個 斑點 ， 是 唯二 的 負電荷 片段 。 英格拉姆 發現 ， 如果 他 讓 同樣 的 血紅素 多 跑 幾 次 （ 不過 做法 與 時間 都 要 一模一樣 ） ， 最後 得出 的 斑點 圖案 常常 完全 相等 ， 甚至 不同 張 濾紙 的 圖案 都 可以 重疊 。 他 稱 這樣 的 層析圖 為 蛋白質 的 「 指紋 」 （ 見 左 頁 上 圖 ） 。 這 項 技術 及 名稱 一直 廣泛 使用到 現在 。 指紋 透露 蛋白質 玄機 果然 ， 鐮狀 細胞 與 正常 紅血球 的 血紅素 會 製造出 不同 的 「 指紋 」 。 在 鐮狀 細胞 血紅素 的 分解 片段 層析圖 上 ， 就 在 中性 電荷 片段 垂直 那 條 的 左邊 有 一 個 大團胜 ?
 
斑點 （ 見 下 頁 右上 圖 標示 斜線 那 塊 ， 由 此 透露出 它 帶 的 是 微量 正電荷 ） ， 具有 鮮豔 的 橙色 。 而 在 正常 紅血球 血紅素 的 指紋 中 ， 該 位置 並 沒有 斑點 ， 但是 仔細 檢查 會 發現 中性 電荷 骨幹 上 有 一 個 外圍 是 橙色 的 斑點 ， 有 一 部分 被 其他 斑點 遮住 （ 見 左 頁 左上 圖 標示 點狀 那 塊 ） 。 層析法 是 非常 有 彈性 的 ， 一旦 找出 差異 之 處 ， 就 可以 把 它們 放大 得 更 清楚 。 英格拉姆 採用 更 大 的 樣本量 ， 幫 兩 種 血紅素 再 跑 一 次 電泳 ， 然後 用 剪刀 將 每 張 濾紙 的 中性 斑點 及 移動 最 慢 的 正電荷 斑點 剪下來 。 接著 ， 他 分別