。 他 把 寡核苷酸 的 長度 減短 ， 想 看看 縮小 到 多 短 ， 配對 還可以 成功 。 最後 的 結果 讓 他 嚇 了 一 大 跳 ， 他 說 ： 「 我 走進 〔 尼倫伯格 的 〕 小 辦公室 ， 我 幾乎 克制不了 自己 ， 我 問 他 認為 寡核苷酸 至少 要 多 長 才 可以 被 辨識 … … 『 你 相信 六 個 嗎 ？ 你 相信 五 個 嗎 ？ 你 相信 三 個 嗎 ？ 』 … … 他 差一點 沒 摔倒到 地上 。 」 沒 錯 ， 萊德 發現 在 濾紙 實驗 中 ， 只要 三聯體 就 足夠 做 讓 tRNA 辨認 。 也 就是 只要 提供 UUU ， 就 可以 偵測到 帶 著 放射性 的 苯丙胺酸 的 tRNA 。 太 棒 了 ， 這樣一來 ， 就 可以 拿 所有 64 種 三核苷酸 來 測試 了 。 但是 首先 要 合成 所有 這些 三核苷酸 序列 的 RNA ， 技術 上 雖然 可行 的 ， 但 不 是 隨手 可 得 ， 需要 大 老闆 赫普爾 和 同事 們 的 幫忙 。 最終 ， 他們 用 這 個 方法 解出 64 個 密碼子 中 47 個 。 到 這 個 階段 ， 尼倫伯格 的 實驗 進度 遠遠 超越 歐喬亞 的 實驗室 ， 後者 就 放棄 ， 停止 競爭 。 意外 闖入 者 這 段 解碼 的 研究 熱潮 中 ， 合成 特定 序列 的 寡核苷 來 進行 體 外 合成 的 需求 越來越 迫切 ， 但是 當時 特定 序列 的 寡核苷酸 只 能 合成 幾 個 核苷酸 長 ， 合成 的 蛋白質 太 短 ， 無法 被 酸 沉澱 下來 。 這 時候 ， 具有 特定 序列 的 長寡 核苷酸 意外 出現 了 ， 它 出現 在 威斯康辛 大學 印裔 化學家 柯阮納 （ Har Gobind Khorana ） 的 實驗室 。 柯阮納 在 研究 寡核苷酸 的 合成 ， 他 的 策略 是 用 DNA 當 模板 ， 用 RNA 聚合酶 進行 轉錄成 RNA 寡核苷酸 。 當時 特定 序列 的 DNA 也 可以 用 化學 方法 合， 長度 可 達 10 ~ 15 個 核苷酸 。 特定 序列 的 RNA 寡核苷酸 只 能 合成到 個位數 的 核苷酸 ， 所以 柯阮納 想 採用 這樣 間接 的 方法 ， 製造 比較 長 的 寡核苷酸 。 柯阮納 用 一 串 十幾 個 A 的 單股 DNA ， poly ( dA ) ， 做 模板 ， 結果 轉錄出來 的 RNA 竟然 很 長 ， 超過 一百多 個 核苷酸 ， 遠 超過 模板 的 長度 。 他 本來 以為 實驗 失敗 ， 後來 才 發現 做出來 的 RNA 確實 是 一 長 串 的 U 。 原來 這 是 因為 轉錄 過程 中 ， DNA 模板 與 轉錄出來 的 RNA 之間 鹼基 的 配對 鬆動 ， 發生 「 滑動 」 ， 同樣 的 模板 序列 一再 被 重複 轉錄 的 結果 。 後來 他 用 反覆 的 AT 序列 （ 亦即 ATATAT … … ） 當做 模板 ， 同樣 也 轉錄 很 長 的 UA 重複 序列 的 RNA ， 顯然 滑動 現象 是 轉錄 重複 序列 的 共同 特性 。 柯阮納 無意 中 發現 了 一 個 製造 特定 重複 序列 的 RNA 。 1960年 ， 他用 這 方法 合成 有 2 ~ 4 個 核苷酸 重複 的 長 RNA ， 放入 體 外 合成 系統 測試 ， 得到 很 有用 的 結果 。 以 UC 的 重複 序列 （ … … UCUCUCUCUC … … ） 為 例子 ， 不管 用 哪 個 讀 框 轉譯 ， 它 都 是 UCU-CUC 兩 種 密碼子 的 重複 ， 因此 只 能 編碼 兩 種 重複 的 胺基酸 。 這 RNA 在 體 外 系統 中 做出 的 蛋白質 ， 確實 只有 白胺酸 和 絲胺酸 ； 所以 這 兩 個 胺基酸 的 密碼子 是 UCU 和 CUC （ 哪 一 個 胺基酸 對應 哪 一 個 密碼子 還 不 確定 ） 。 如果 用 UUC 三核苷酸 重複 的 RNA 測試 ， 就 會 有 三 種 讀框 ， 出現 UUC 、 UCU 、 CUU 三 種 密碼子 ， 編碼 三 種 胺基酸 。 實驗 結果 ： 這 RNA 確實 做出 三 種 蛋白質 ， 分別 是 重複 的 苯丙胺酸 、 重複 的 白胺酸 和 重複 的 絲胺酸 。 這些 數據 堆疊 的 累積 ， 讓 柯阮納 很 快 解出 很多 密碼子 。 當 尼倫伯格 實驗室 公佈 了 濾紙 附著 技術 之後 ， 柯阮納 也 用 化學 方法 合成 所有 64 種 三核苷酸 ， 來 進行 濾紙 附著 實驗 。 到 1965年 ， 他 的 實驗室 總共 解出 了 56 個 密碼子 ， 而 尼倫伯格 的 實驗室 解出 的 密碼子 增加 到 54 個 。 還 有 幾 個 密碼子 仍然 有 問題 ， 有的 是 沒有 任何 附著 ， 或者 附著 的 結果 模稜兩可 。 這些 密碼子 必須 用 其他 方法 解碼 。 無意義 突變 的 發現 這些 未 解出 的 密碼子 ， 其中 有些 可能 是 假設 中 存在 的 「 終止 密碼子 」 （ termination codon ） 。 所謂 「 終止 密碼子 」 就是 位在 基因 編碼 蛋白質 密碼子 最後 的 一 個 密碼子 。 這 個 密碼子 是 「 無意義 」 的 ， 不 編碼 任何 胺基酸 ， 是 停止 轉譯 的 訊號 。 終止 密碼子 應該 沒有 對應 的 胺醯–tRNA ， 所以 在 過濾 實驗 當然 得 不 到 結果 。 可是 過濾 實驗 沒有 結果 ， 也 不能 就 說 它 是 終止 密碼子 ， 因為 那 可能 只 是 技術 問題 。 終止 密碼子 的 解決 是 依賴 遺傳學 的 幫助 。 在 終止 密碼子 被 確定 和 解碼 之前 ， 先 出現 的 是 「 無意義 突變 」 （ nonsense mutation ） 。 這 種 突變 會 造成 轉譯 提早 停止 ， 合成 的 蛋白質 變短 。 第一 個 被 發現 的 無意義 突變 叫做 「 琥珀 突變 」 （ amber mutation ） ， 也 是 一 項 意外 的 發現 。 1960年 ， 加州 理工 學院 的 研究生 斯史坦柏格 （ Charley Steinberg ） 和 博士 後 研究員 艾普斯坦 （ Dick Epstein ） 異想天開 ， 想 尋找 「 反 rII 」 的 T4 突變株 。 所謂 「 反 rII 」 突變 就 是 和 rII 性質 相反 的 突變株 。 rII 能夠 感染 大腸 桿菌 B ， 不能 感染 K12 λ ； 他們 想 找 的 「 反 rII 」 突變 ， 就 是 反過來 不能 感染 B ， 但是 能夠 感染 K12 λ 的 突變 。 這 時候 ， 有 位 同學 伯恩斯坦 （ Harris 複 Bernstein ） 來 邀 他們 去 看 電影 。 史坦柏格 和 艾普斯坦 請 他 留下來 幫忙 做 實驗 ， 告訴 他 如果 找到 突變株 ， 就 用 他 名字 命名 。 結果 他們 真的 找到 感染 K12 λ 不 感染 B 的 T4 突變株 ， 他們 就 把 這 種 突變 叫做 「 琥珀 」 （ 「 伯恩斯坦 」 德文 的 意思 是 「 琥珀 」 ） 。 後來 他們 卻 發現 事情 不 是 如 他們 所 想像 的 。 這些 T4 琥珀 突變 株 不能 感染 B ， 是 因為 它們 都 發生 一 種 致死 的 突變 。 他們 用 的 那 株 K12 λ 能夠 被 感染 ， 是 因為 它 帶有 一 個 特別 的 突變 ， 能夠 「 壓抑 」 T4 的 琥珀 突變 。 這 株 K12 λ 攜帶 的 突變 就 被 稱為 「 壓抑 突變 」 （ suppression ， mutation ） ， K12 λ